天麻壮骨丸是由天麻、人参、秦艽等2O味中药材组成,具有祛风除湿、活血通络、补肝肾、强腰膝之功效。天麻壮骨丸主治
风湿阻络、偏正头痛、头晕、风湿痹痛、腰膝酸软、四肢麻木等症。天麻壮骨丸的标准收载于《四川省药品标准》1993年版(中成药成方制剂),在天麻壮骨丸质量标准中可控项目非常少。为控制天麻壮骨丸的质量,特考虑用薄层色谱法对制剂中的人参、秦艽进行定性鉴别,为该品种建立完善的质量控制体系提供可靠依据。
仪器与试药:CQ-25o型超声波清洗器(上海超声波仪器厂),LD-2A型离心机,硅胶G(青岛海洋化工厂),D101型大孔树脂柱,ZF-1三用紫外分析仪(上海精科实业有限公司),自制薄层板(5cm×20cm,0.3mm)。所用试剂均为分析纯。天麻壮骨丸样品,人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rbl对照品、龙胆苦苷对照品(均从中国药品生物制品检定所购买)。
方法:人参的鉴别取本品20g,研细,加甲醇80mL,超声处理40min,放冷,滤过,滤液蒸干。残渣加氨试液20mL使其溶解,用三氯甲烷振摇提取3次,每次20mL,弃去三氯甲烷液,氨试液用水饱和的正丁醇提取3次,每次20mL,合并正丁醇提取液,蒸干。残渣加氨试液5mL使其溶解,加于D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm,柱高12cm)上,用氨试液100mL洗涤,弃去氨洗涤液,再用水洗涤至中性,弃去水洗涤液,再用30乙醇50mL洗涤,弃去30 乙醇洗涤液,继用7O 乙醇50mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇lmL使溶解,作为供试品溶液。另取人参皂苷Re对照品,加甲醇制成每lmL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述2种溶液各5~ l0 1,分别点于同一以羧甲基纤维索钠为黏合剂的硅胶G薄层上,分别以三氯甲烷一甲醇一水(13:7:2)10℃ 以下放置过夜的下层溶液和三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一水(15:4O:22:10)10℃ 以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以lO 硫酸乙醇溶液,在105℃ 加热至斑点显色清晰,置紫外光灯(365nm)下检视。
结果:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的芡尤斑点。用缺人参的阴性样品20g,同法制成阴性对照溶液,经展开、显色后观察,结果在阴性供试品色谱中,与对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点。
由于天麻壮骨丸由2O味中药材组成,在处方中,天麻属君药。本应优先考虑其天麻壮骨丸含量测定及薄层色谱鉴别。但在研究其含量测定过程中,发现无论采取何种方法,均无法对天麻壮骨丸进行有效分离。在进行天麻薄层色谱研究时,采用了多种提取方法及显色剂,均无法清晰地鉴别出天麻壮骨丸中蛇床子素的特征斑点。可能是因为天麻壮骨丸处方中伞形科类药材较多,所含化学成分极为相近,相互之间有干扰,很难单独鉴别出某一味伞形科药材,实验过程中曾采用薄层色谱法,考察了蛇床子素、白芷、防风、羌活、当归、川芎 。结果发现在蛇床子素对照品色谱相应的位置上,有多味药材均在相同位置上有相同的斑点,不能排除阴性干扰,故无法对君药天麻进行薄层色谱鉴别。
在做人参的薄层色谱鉴别过程中,也曾以人参皂苷Rbl、Rgl作为对照品,但在供试品色谱中,与人参皂苷Rbl、Rgl对照品色谱相应的位置上,斑点不明显,分离度较差,无法判断其斑点的专属性,故未列人参皂苷Rbl、Rgl的薄层色谱鉴别。文中所述天麻及秦艽的薄层色谱鉴别,均采用相应的药材溶液和阴性溶液作对照,并进行了3批样品实验。结果表明,各检出成分不受其他成分的干扰,专属性强,重复性好,方法简便。
(本文节选自《天麻壮骨丸的薄层色谱研究》)