环孢素A(新山地明)是目前公认的抑制移植排斥反应最为有效的药物之一,自20世纪70年代应用于临床以来,作为免疫抑制剂发挥了极其重要的作用。正常生理妊娠类似于同种异体移植,胚胎作为自然的同种移植物不受母体免疫排斥是免疫排斥现象的唯一例外,实际上反映母体对胚胎的免疫耐受。而妊娠失败多因母体对胚胎的免疫排斥所致。
环孢素A研究通过原代培养早孕期人细胞滋养细胞及JAR滋养细胞株,在CsA作用下,研究环孢素A对早孕期人细胞滋养细胞titin表达的调控作用,为妊娠疾患的治疗提供线索。
环孢素A(新山地明)对早孕期人细胞滋养细胞titin表达的调控作用
目的 探讨CsA对早孕期人细胞滋养细胞titin表达的调控作用
方法 Western blot观察pERK1/2的表达;ELISA分析MAP激酶活性;RT-PCR、Western blot检测MEK特异性抑制剂U0126预处理或不预处理后CsA对细胞滋养细胞titin mRNA的转录及蛋白表达的影响。
结果
(1)CsA以时间和浓度依赖方式活化早孕期人细胞滋养细胞MEK激酶、促进ERK1/2磷酸化,U0126预处理则抑制其基础和CsA诱导的MAPK激酶活化和ERK1/2磷酸化。
(2)CsA以时间和浓度依赖方式诱导早孕期人细胞滋养细胞titin mRNA的转录,1.0μmol/LCsA处理72h可诱导titin蛋白的表达。
(3)U0126呈剂量依赖性地抑制CsA诱导的早孕期人细胞滋养细胞titin mRNA的转录。
(4)相关性分析显示CsA对滋养细胞生物学功能调控与其诱导滋养细胞titin表达有关。
结论
(1)CsA呈时间剂量依赖方式活化MAPK/ERK1/2信号通路,促进早孕期人细胞滋养细胞titin的表达。
(2)CsA通过诱导滋养细胞表达titin参与调控其生物学功能。
通过环孢素A的系列实验结果表明:
(1)胰蛋白酶/DNase Ⅰ分步消化,Percoll密度梯度离心法分离纯化滋养层细胞,方法简便可靠。CD133-2/AC141是鉴定细胞滋养层细胞的可靠分子。
(2)CsA一方面活化MAPK/ERK1/2信号通路促进人细胞滋养细胞增殖、迁移能力与侵袭性、抑制其凋亡,;另一方面抑制Ca2+/Calcineurin/NFAT信号通路促进人滋养细胞迁移能力和侵袭性。
(3)CsA通过MAPK/ERK1/2信号通路活化转录因子AP-1、NF-κB,调控滋养细胞的体外生物学行为。
(4)CsA通过活化MAPK/ERK1/2信号通路诱导滋养细胞titin表达。
(5)CsA诱导滋养细胞表达titin调节滋养细胞生物学行为。
为CsA可能成为防治反复自然流产、妊娠高血压综合征等妊娠并发症的潜在药物提供了理论依据及有用线索。
参考文献:
①杜美蓉,《环孢素A对滋养细胞生物学功能及其信号转导的调节作用》。复旦大学,2005.